SP-A restaure l’oligomérisation et la sécrétion de mutants de SFTPA1 et SFTPA2

Tifenn Desroziers (1) , Yohan Soreze (2, 1) , Serge Amselem (1, 2) , Florence Dastot Le Moal (2, 1) , Valérie Nau (2) , Camille Louvrier (2, 1) , Marie Legendre (1, 2) , Sonia Karabina (1) , Nadia Nathan (2, 1)

1 U933 - Maladies génétiques d'expression pédiatrique
2 CHU Trousseau [APHP]

Introduction La protéine A du surfactant (SP)-A est composée de SP-A1 et SP-A2 (codés respectivement par SFTPA1 et SFTPA2) oligomérisées en hexamères de SP-A1 et SP-A2. Les variants hétérozygotes de SFTPA1 et SFTPA2 sont associés à des fibroses et des adénocarcinomes pulmonaires. Cette étude a pour but d’analyser l’effet des variants de SFTPA1 et SFTPA2 sur la localisation subcellulaire, l’oligomérisation et la sécrétion de SP-A. Méthodes Des cellules HEK293T ont été co-transfectées de façon transitoire avec des vecteurs d’expression des ADNc de SFTPA1 ou SFTPA2 normaux (wt), mutés (m) ou vecteur vide (vv) selon les combinaisons suivantes : [SFTPA1_wt + vv], [SFTPA2_wt + vv], [SFTPA1_m + vv], [SFTPA2_m + vv], [SFTPA1_wt + SFTPA2_wt], [SFTPA1_wt + SFTPA1_m], [SFTPA1_wt + SFTPA2_m], [SFTPA2_wt + SFTPA2_m] ou [SFTPA2_wt + SFTPA1_m]. Plusieurs variants ont été testés. La localisation subcellulaire des protéines exprimées a été analysée par immunofluorescence (IF) après transfection dans des cellules HEK293. Le profil d’oligomérisation et la sécrétion ont été évalués par western blot (WB) des protéines du lysat cellulaire et du surnageant. La spécificité des interactions entre SP-A1 et SP-A2 a été vérifiée par co-immunoprécipitation (co-IP). Pour chaque expérience, des Tags différents ont été introduits dans les protéines recombinantes pour identifier les isoformes en jeu. Résultats En IF, les protéines SP-A2_wt sont décelables dans des vésicules de sécrétion alors que le marquage cellulaire associé aux protéines SP-A2_m est diffus dans le cytoplasme sans marquage vésiculaire. Cette observation confirme l’absence de sécrétion de SP-A2_m que nous avions précédemment rapportée. En WB, le profil d’oligomérisation de SP-A2_m est anormal avec la formation de tétramères sans hexamères décelables, et la sécrétion de SP-A2_m est absente. La co-transfection [SFTPA2_wt + SFTPA2_m] conduit à l’augmentation de l’expression de SP-A2_m, à la restauration des hexamères et d’une sécrétion pour deux des trois variants testés. Les mêmes résultats ont été retrouvés avec la co-transfection [SFTPA2_wt + SFTPA1_m]. La co-transfection [SFTPA1_wt + SFTPA2_m] conduit aussi à l’augmentation de l’expression de SP-A2_m, sans toutefois restaurer la formation des hexamères ni une sécrétion significative de SP-A2_m. Les mêmes résultats ont été retrouvés avec la co-transfection [SFTPA1_wt + SFTPA1_m]. Les expériences de co-IP ont par ailleurs confirmé la spécificité des interactions SP-A1/SP-A2. Conclusion Cette étude révèle une interaction spécifique de SP-A1 et SP-A2 associée, lors de la co-expression avec SP-A2_wt, à une augmentation de l’expression de SP-A1_m ou SP-A2_m, mais aussi à la restauration d’un profil d’oligomérisation en hexamères et à une sécrétion de protéines du surfactant. Dans une perspective thérapeutique, ces résultats permettent d’envisager l’adjonction de SP-A2 exogène dans des modèles cellulaires surexprimant SP-A1_m ou SP-A2_m.

Domaines: Génétique humaine; Pneumologie et système respiratoire

Tifenn Desroziers, Yohan Soreze, Serge Amselem, Florence Dastot Le Moal, Valérie Nau, et al.. SP-A restaure l’oligomérisation et la sécrétion de mutants de SFTPA1 et SFTPA2. Assises de Génétique Humaine et Médicale, Jan 2024, Paris, France. ⟨inserm-04405049⟩